在超低温冰箱中存储生物样品的**佳实践

虽然许多研究人员经常使用超低温冰箱，但我们很少有人知道我们可以采取的所有措施来真正保护我们的样品。2012年5月，哈佛脑组织资源中心（一家着名的脑库）的超低温冰箱失败，损坏了世界上**大的自闭症大脑样本集合的三分之一。冷冻室外部温控器读数为-80°C，但内部温度实际上是冰箱温度。样本的丢失严重阻碍了自闭症的研究，强调了实施低温保存**佳实践的重要性。在本版本的Bench Tips中，我们建议您在超低温冰箱中保存样品的四个技巧。

建立冗余

大多数实验室设有带报警系统的冷冻柜，但无法安装独立的温度监控器和适当的备用系统。McLean冰箱是哈佛大脑组织资源中心的24个冰箱之一，受到两个独立报警系统的保护。工作人员每天检查两次外部恒温器，以确保组织样本保持在-80°C。然而，随着温度的升高，外部恒温器继续读取-79°C，因此无法触发警报。

如果实验室有独立的温度监控器连接到警报器，通过一个单独的端口进入冷冻室，样品可能已经不再使用。另一个好的投资是CO2或液氮备用系统。如果冷冻机出现故障，系统可以将气体释放到冷冻室，为您提供额外的时间将样品转移到功能单元。确保始终有一个容量相似的备用冷冻柜来容纳转移的样品。

防止冷冻室烧伤

冷冻是一种复杂的现象，尚未完全理解。各种冰冻温度产生不同种类的冰晶，其形成速度不同。在-80℃的环境中，形成稳定的六方晶体，但是进入和离开这种稳定的冷冻状态是一个微妙的过程。通常，细胞越大，慢慢冷却就越重要。即使对于更耐受的可渗透细胞，在环境温度下每分钟1℃的冷却速率也是**佳的。预先添加冷冻保护添加剂（如DMSO或甘油）可以在冷冻过程中保护细胞免受溶质浓度增加和冰晶形成的影响。DMSO在细胞内冷冻之前促进细胞更大程度的脱水，而甘油是一种毒性较小的替代品。DMSO和甘油通常以??5％**10％（v / v）的浓度使用，但它们很少一起使用，除了植物细胞的研究。使用已知细胞类型的**高浓度来耐受和消毒试剂级溶液。相反，对于大多数细胞，应尽快使用37°C水浴进行解冻。

为细胞类型定制条件

细胞类型，细胞活力，生长条件和细胞的生理状态只是在制备冷冻保存细胞之前评估的一些因素。在植物细胞中，**好从对数晚期收获细胞并使用两步冷却过程 - 将细胞保持在-30℃一段时间，然后在-80℃冷冻。微生物细胞，特别是在充气条件下生长的细菌和酵母，比未经充气的细胞表现出更强的对冷却和冷冻的有害影响的抵抗力。冷冻真菌孢子时，确保在冷冻前不发芽。通过细胞计数确定培养物冷冻前后的活力和估计恢复。计数的比较将表明您的技术成功。通常，**初存在的细胞数量越多，

积极组织

每个实验室建立-80°C存储协议非常重要。为所有未标记的样本制定一个无例外的抛出规则。实验室成员只有在将样品编入中心位置后才能进入冷冻室，必须定期备份。

特别注意标签。蓝色**性标记倾向于褪色并在冰箱中变得难以辨认。直接写在乙醇保存样品上的信息几乎不可避免地在聚丙烯管上消失。许多粘贴标签在超低点下降; 在进行大规模购买之前测试几种不同的类型。特别注意螺旋环顶部的垫圈，这些垫圈会随着时间的推移而破裂。每年对所有储存材料进行除霜和清洁可使记录保持平直，并可能使实验室无法购买另一台冷冻机进行溢流。此外，请记住，大多数研究人员存储在-80°C的习惯。请记住，温度越低，消耗的能量越多。某些类型的样品 - 微生物培养物，酵母和真菌 - 在-70°C储存中很好。

作为建议的**后一句话，能源消耗过多的迹象 - 如冷凝，设备前面的水泄漏，过热的房间和响亮的声音 - 表明冰箱有问题。留意并定期进行维护; 这些步骤应该保证您的冰柜安全，您的样品可以在未来几年内保持活力。